ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) היא שיטה ביוכימית לזיהוי חלבונים או אנטיגנים בדוגמה. אנטיגן הוא חומר שמערכת החיסון מזהה. בשיטה מקשרים נוגדן או אנטיגן לאנזים (אנזים = חלבון שמזרז תגובה כימית). אחרי הוספת סובסטרט, האנזים משנה את צבעו של הסובסטרט. שינוי הצבע מעיד על נוכחות האנטיגן. בסוף מוסיפים חומצה כדי לעצור את התגובה. את עוצמת הצבע מודדים בספקטרופוטומטר (מכשיר שמודד צבע באורכי גל שונים). כך אפשר להחליט אם אנטיגן קיים וכמה ממנו יש (אנליזה איכותית וכמותית).
הבדיקה מבוצעת על מצע קשיח, בדרך כלל פלטת פלסטיק עם בארות. שלבי הבדיקה בקיצורים: מצמידים אנטיגן לפלטה, שוטפים שאריות, וחוסמים משטחים שלא רצויים. מוסיפים נוגדן ראשוני הספציפי לאנטיגן ומנקים עודפים. לאחר מכן מוסיפים נוגדן שניוני שמצומד לאנזים; הוא נקשר לנוגדן הראשוני. מוסיפים סובסטרט שהאנזים משנה וצובע. כשמספיק צבע נועלים את התגובה בחומצה ואז קוראים את התוצאה בספקטרופוטומטר. חשוב לסיים את התגובה בזמן כדי לא לאבד את ההבדלים בין הדוגמאות.
ELISA נחשבת לשיטה מדויקת לגילוי אנטיגנים וחלבונים. יש לה שימושים קליניים ומחקריים רבים, למשל: מציאת דם בשתן, אבחון נוגדנים בסרום (כמו בבדיקת HIV), גילוי הורמונים בבדיקת הריון, בדיקות סמים בדם, וגילוי מיקרואורגניזמים במקווה מים.
אלייזת סנדוויץ', כדי להגביר רגישות מוסיפים לפלטה נוגדן קיבוע (נוגדן סנדוויץ') שקשור לאנטיגן ואז ממשיכים כרגיל. כך מקבלים "סנדוויץ'" של נוגדנים סביב האנטיגן.
אלייזת סנדוויץ'-ביוטינילציה, שיטה דומה שבה משתמשים בביו־טין (מולקולה שנקשרת חזק לאבידין) במקום בנוגדן שניוני שונה. שיטה זו מורידה את הצורך בנוגדן סנדוויץ' שונה.
ELISA עקיפה, מתאימה לכימות נוגדנים בסרום. את המצע חושפים לחלבונים של הפתוגן, מוסיפים סרום מהנבדק. אם יש נוגדנים הם נקשרים. לאחר מכן מוסיפים נוגדן שניוני נגד נוגדנים אנושיים שמצומד לאנזים. תגובת צבע מצביעה על נוכחות נוגדנים, ומרמזת על חשיפה או הדבקה בעבר.
ELISA היא בדיקה במעבדה שמגלה חלבונים או אנטיגנים. אנטיגן זה חלק שגוף יכול לזהות. בבדיקה מדביקים את החומר לפלטה קטנה מפלסטיק. שמים נוגדן. נוגדן הוא חלבון שמתחבר לאנטיגן. מוסיפים נוגדן שני עם אנזים. אנזים (חלבון שעושה תגובות) גורם לסובסטרט להפוך לצבע. הצבע אומר אם האנטיגן נמצא. בסוף עוצרים את התגובה עם חומצה וקוראים את הצבע במכשיר.
שלבים פשוטים: מדביקים אנטיגן לפלטה, שוטפים, חוסמים מקומות לא רצויים.
מוסיפים נוגדן ראשוני, שוטפים.
מוסיפים נוגדן שני עם אנזים, ואז סובסטרט. הצבע שנוצר קוראים במכשיר.
שיטה זו עוזרת למצוא דם בשתן. היא גם משמשת בבדיקות הריון. אפשר לגלות נוגדנים כנגד וירוסים, כמו בבדיקות HIV. משתמשים בה גם לבדיקות סמים ולבדיקת מים.
אלייזת סנדוויץ' היא גרסה רגישה יותר. יש גם גרסה עם ביוטין ואבידין. יש גרסה שמודדת אם יש נוגדנים בדם.
תגובות גולשים